食品中霉菌檢測(cè)常見問題，你都解決了嗎？

不是分類學(xué)上的名詞，而是一些絲狀真菌的通稱，屬真菌的一部分；其對(duì)人類具有雙重性，有利的方面是它可以用來釀造、工業(yè)發(fā)酵、抗生素和?制劑的生產(chǎn)等，不利方面是它能引起農(nóng)副產(chǎn)品、食品、原料及器材的腐爛，也感染并引起人類和動(dòng)、植物的多種疾病，少數(shù)種類，如黃曲ù，能產(chǎn)生黃曲ù毒素，黃曲ù毒素是一種致癌物質(zhì)，Σ害人、畜的健康和生命。因此，ù菌的檢測(cè)對(duì)于食品的安全性很重要。

食品中常見的ù菌：?ù屬、根ù屬、曲ù屬、青ù屬等。

1、 取樣的代表性。

2、 取樣工具的無菌。空氣中ù菌的孢子含量很高，所以，取樣的工具、容器等要經(jīng)過嚴(yán)格的高壓滅菌。

3、 檢樣的方法。

(1)由于ù菌易被攜帶，所以，檢樣時(shí)操作人員應(yīng)盡量避免自身攜帶的可能。

(2)樣品的均質(zhì)及充分振搖。因?yàn)橛行╂咦邮沁B成串的，故均質(zhì)和振搖能使其充分散開，同時(shí)，在各梯度連續(xù)稀釋時(shí)，也要用滅菌吸管反復(fù)吹吸幾次，使孢子充分散開。

4、培養(yǎng)溫度和時(shí)間。培養(yǎng)溫度 25-28℃培養(yǎng)，5 天后觀察。

ù菌檢驗(yàn)中常用的培養(yǎng)基：孟加拉紅瓊脂、馬鈴薯葡萄糖瓊脂、察氏瓊脂、高鹽察氏瓊脂等。

5、檢樣中常見的問題。

(1) 不同稀釋度計(jì)數(shù)結(jié)果不相同；

(2) 不生長或生長很好連成片無法計(jì)數(shù)；

原因：

①稀釋時(shí)δ經(jīng)反復(fù)振搖，吹吸，導(dǎo)致孢子δ充分散開，影響了計(jì)數(shù)的結(jié)果。

②由于培養(yǎng)基不適宜，PH 值低等，致使生長較慢。

③觀察時(shí)間的掌握。真菌生長較慢，故需 5d 后才能觀察出結(jié)果。

微生物操作中常見問題的討論與分析

1、 劃線獲得單個(gè)菌落的方法。劃不出單個(gè)菌落的原因：

(1) 平板上有過多的水分；

(2) 劃線時(shí)接種環(huán)δ經(jīng)反復(fù)灼燒；

(3) 多區(qū)劃線，三區(qū)或四區(qū)劃線。

2、 涂布和傾注的區(qū)別：

涂布利于觀察，但由于涂布棒上會(huì)帶有少量的菌液，可能影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性；傾注更為準(zhǔn)確，但不利于觀察菌落的狀態(tài)。

Beuchat和Matsuda等人分別對(duì)這兩種方法作了大量比較試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，對(duì)ù菌計(jì)數(shù)來說，涂抹法有以下幾方面*于傾注法：

①培養(yǎng)出的ù菌菌落數(shù)較多；

②培養(yǎng)所需的時(shí)間較短；

③ù菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育，便于鑒定。這是因?yàn)榻^大多數(shù)ù菌是好氧的，在培養(yǎng)基表面生長快，發(fā)育好，而混在培養(yǎng)基中發(fā)育就受影響，而且在培養(yǎng)基傾注時(shí)ù菌孢子易受熱損傷。

3、培養(yǎng)基的選擇

培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。目前國標(biāo)方法中使用的培養(yǎng)基有：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養(yǎng)基(RBC)、高鹽察氏培養(yǎng)基(CAO)，其中PDA和RBC適合于一般的ù菌和酵母菌生長，而CAO則適合于高滲性ù菌生長，酵母菌幾乎不長。

在日常檢測(cè)中我們發(fā)現(xiàn)，有些常見的耐高滲性ù菌，如局限曲ù、謝瓦曲ù、赤曲ù、Wallemia等在PDA、RBC上生長非常緩慢或不長，而這些菌在高滲培養(yǎng)基如M40Y、DG18則正常生長。孢子、形態(tài)特征發(fā)育良好，而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生長，因此，若能同時(shí)采用PDA和M40Y(或DG18)分離培養(yǎng)各類樣品中的ù菌，將能更全面地反映出污染ù菌的菌相。特別是對(duì)干燥食品、高糖食品、淹漬食品等，更有必要同時(shí)采用M40Y或DG18。

由于ù菌中很多種類不會(huì)產(chǎn)生有毒的ù菌毒素，Σ害較小，而有的菌株即使污染數(shù)量不多，但其產(chǎn)生的ù菌毒素卻Σ害較大，因此僅作ù菌計(jì)數(shù)并不能全面反映其Σ害程度，重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判斷被污染食品的安全程度。

為此，國外有些研究者設(shè)計(jì)出各類選擇性培養(yǎng)基，可以識(shí)別產(chǎn)毒的ù菌。如AFPA培養(yǎng)基用于分離黃曲ù毒素產(chǎn)生菌高污染率的食品。產(chǎn)黃曲ù毒素的菌株黃曲ù和寄生曲ù在AFPA上30℃培養(yǎng)2~3天就形成背面有亮橙黃色的特征性菌落，非常容易識(shí)別。有人利用該培養(yǎng)基分離黃曲ù高污染食品花生、玉米等,取得了滿意的結(jié)果。因此,針對(duì)不同樣品,有目的地設(shè)計(jì)出相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基,以篩選污染菌中的Σ險(xiǎn)菌群,將是一個(gè)值得探索的方向。

4、 培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問題：

(1)滅菌溫度要嚴(yán)格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高，過高會(huì)導(dǎo)致糖分焦化，影響質(zhì)量；

(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會(huì)破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分；

(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌，反復(fù)滅菌也會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞；

(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后，要搖勻。

5、 平板的保存：

大多數(shù)平板如 VRBA、DC、尿素?生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

6、 產(chǎn)品的保存：

(1) 干粉培養(yǎng)基：避光干燥，結(jié)塊后不能使用。

(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時(shí)，要常溫解凍，避免水浴加熱。

(3) 抗生素類：冷藏保存，溫度過高會(huì)導(dǎo)致靈敏度的下降。

(4) 兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會(huì)影響結(jié)果。

7、 觀察時(shí)間的掌握：

按 SN、GB 等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時(shí)間進(jìn)行觀察，時(shí)間過短或時(shí)間過長，單菌落的特征都不會(huì)很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基，時(shí)間短單菌落看不到卵磷脂環(huán)，時(shí)間長綿羊李氏菌也會(huì)產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此，時(shí)間過長，李氏菌使整個(gè)平板成黑色，不利于觀察單個(gè)菌落。

8、 添加劑的添加：

(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。

(2)定量。過多會(huì)抑制一些目標(biāo)菌，太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

8、 培養(yǎng)溫度的掌握：

(1)真菌類。25-28℃培養(yǎng)

(2)細(xì)菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在 30℃左右。

(3)其他一般在 36℃左右。

9、 接種方法：

常用的方法主要有劃線、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

10、革蘭氏染色方法：

染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。

11、最適計(jì)數(shù)范Χ

ù菌菌落由孢子和菌絲組成，相當(dāng)擴(kuò)散，在直徑9cm的平皿里，菌落數(shù)稍多就相互交叉重疊，影響計(jì)數(shù)，但數(shù)量太少又會(huì)產(chǎn)生較大的誤差，因此選擇適當(dāng)?shù)南♂尪扔?jì)數(shù)是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。

我們對(duì)這方面作了一些觀察研究，首先是將實(shí)驗(yàn)菌株的斜面培養(yǎng)物制成含有約10⁶個(gè)/mL的孢子懸液，并用血球計(jì)數(shù)器在顯微鏡下準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，然后將孢子懸液作10^-1~10^-6倍稀釋，吸取不同稀釋度的稀釋液接種于PDA，25℃培養(yǎng)5天后計(jì)數(shù)。30種常見ù菌的兩種不同計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果比較顯示，大部分菌株?平板含有10~50個(gè)菌落的稀釋度時(shí)的計(jì)數(shù)與顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)果接近；有近一半的菌株，?個(gè)平板含50~100個(gè)菌落已較難計(jì)數(shù)，而大部分菌株，超過100個(gè)/平皿或小于10個(gè)/平皿的計(jì)數(shù)結(jié)果就與顯微計(jì)數(shù)結(jié)果存在較大差別，因此，應(yīng)盡量選擇10~50個(gè)/平皿的稀釋度進(jìn)行ù菌計(jì)數(shù)。

而對(duì)上述提及的菌絲很豐富、菌落特別擴(kuò)散的?ù、根ù、犁頭ù等菌株，則應(yīng)在更少的范Χ內(nèi)計(jì)數(shù)(30個(gè)/平皿以內(nèi))。為控制ù菌的生長速度和菌落的生長范Χ，可在培養(yǎng)基中添加少量抗生素，如氯ù素(50~100mg/L)，金ù素(20~100mg/L)，慶大ù素(50mg/L)，土ù素(100mg/L)等。

12、關(guān)于殺菌的幾個(gè)概念：

(1)抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止，但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(2)死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時(shí)間的作用下，導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(3)防腐：在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物變質(zhì)或防止食物ù變。

(4)消毒：利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。

(5)滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有原微生物的一種措施。