生長(zhǎng)是微生物與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。環(huán)境條件的改變,可引起微生物形態(tài)、生理、生長(zhǎng)、繁殖等特征的改變;或者抵抗、適應(yīng)環(huán)境條件的某些改變;當(dāng)環(huán)境條件的變化超過(guò)一定極限,則導(dǎo)致微生物的死亡。
為了抑制和消除微生物的有害作用,人們常采用多種物理、化學(xué)或生物學(xué)方法,來(lái)抑制或殺死微生物。常用以下術(shù)語(yǔ)來(lái)表示對(duì)微生物的殺滅程度。
滅菌:用物理或化學(xué)方法殺滅物體上所有的微生物(包括病原微生物和非病原微生物及細(xì)菌芽胞、霉菌孢子等),稱為滅菌。
消毒:用物理或化學(xué)方法僅能殺滅物體上的病原微生物,而對(duì)非病原微生物及芽胞和孢子不一定*殺死,稱為消毒。用來(lái)消毒的藥物稱為消毒劑。
防腐:防止或抑制微生物生長(zhǎng)和繁殖的方法稱為防腐或抑菌。用于防腐的化學(xué)藥品稱為防腐劑。某些化學(xué)藥物在低濃度時(shí)為防腐劑,在高濃度時(shí)則成為消毒劑。
無(wú)菌:指沒(méi)有活的微生物存在。采取防止或杜絕一切微生物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體或物體的方法,稱為無(wú)菌法。以無(wú)菌法操作時(shí)稱為無(wú)菌操作。在進(jìn)行外科手術(shù)或微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí),要求嚴(yán)格的無(wú)菌操作,防止微生物的污染。
不同的微生物對(duì)各種理化因子的敏感性不同,同一因素不同劑量對(duì)微生物的效應(yīng)也不同,或者起滅菌作用,或者可能只起消毒或防腐作用。在了解和應(yīng)用任何一種理化因素對(duì)微生物的抑制或致死作用時(shí),還應(yīng)考慮多種因素的綜合效應(yīng)。例如在增高溫度的同時(shí)加入另一種化學(xué)藥劑,則可加速對(duì)微生物的破壞作用。大腸桿菌在有酚存在的情況下,溫度從30℃增至42℃時(shí)明顯加快死亡;微生物的生理狀態(tài)也影響理化因子的作用。營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞一般較孢子抗逆性差,幼齡的、代謝活躍的細(xì)胞較之老齡的、休眠的細(xì)胞易被破壞;微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基以及它們所處的環(huán)境對(duì)微生物遭受破壞的效應(yīng)也有明顯的影響。如在酸或堿中,熱對(duì)微生物的破壞作用加大,培養(yǎng)基的粘度也影響抗菌因子的穿透能力;有機(jī)質(zhì)的存在也干擾抗微生物化學(xué)因子的效應(yīng),或者由于有機(jī)物與化學(xué)藥劑結(jié)合而使之失效,或者有機(jī)質(zhì)覆蓋于細(xì)胞表面,阻礙了化學(xué)藥劑的滲入。
常見(jiàn)的影響微生物生長(zhǎng)與死亡的物理、化學(xué)因素主要有:
1.溫度:
溫度是影響有機(jī)體生長(zhǎng)與存活的重要的因素之一。它對(duì)生活機(jī)體的影響表現(xiàn)在兩方面:一方面隨著溫度的上升,細(xì)胞中的生物化學(xué)反應(yīng)速率和生長(zhǎng)速率加快。在一般情況下,溫度每升高10℃,生化反應(yīng)速率增加一倍;另一方面,機(jī)體的重要組成如蛋白質(zhì)、核酸等對(duì)溫度都較敏感,隨著溫度的增高而可能遭受不可逆的破壞。因此,只有在一定范圍內(nèi),機(jī)體的代謝活動(dòng)與生長(zhǎng)繁殖才隨著溫度的上升而增加,當(dāng)溫度上升到一定程度,開(kāi)始對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不利影響,如再繼續(xù)升高,則細(xì)胞功能急劇下降以至死亡。
就總體而言,微生物生長(zhǎng)的溫度范圍較廣,已知的微生物在零下12-100℃均可生長(zhǎng)。而每一種微生物只能在一定的溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)。各種微生物都有其生長(zhǎng)繁殖的低溫度、適溫度、*高溫度和致死溫度。
低生長(zhǎng)溫度:是指微生物進(jìn)行繁殖的低溫度界限,如果低于此溫度,則生長(zhǎng)*停止。
適生長(zhǎng)溫度:能夠使微生物迅速生長(zhǎng)繁殖的溫度叫做適生長(zhǎng)溫度,在此溫度下,微生物群體生長(zhǎng)繁殖速度*快,代時(shí)短。不同微生物的適生長(zhǎng)溫度是不一樣的。
*高生長(zhǎng)溫度:是指微生物生長(zhǎng)繁殖的*高溫度界限。
致死溫度:*高生長(zhǎng)溫度若進(jìn)一步升高,便可殺死微生物,這種致死微生物的低溫度界限即為致死溫度,致死溫度與處理時(shí)間有關(guān)。
2.氫離子濃度(pH):
環(huán)境中的酸堿度通常以氫離子濃度的負(fù)對(duì)數(shù)即pH值來(lái)表示。環(huán)境中的pH值對(duì)微生物的生命活動(dòng)影響很大,主要作用在于:引起細(xì)胞膜電荷的變化,從而影響了微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收;影響代謝過(guò)程中酶的活性;改變生長(zhǎng)環(huán)境中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的可給性以及有害物質(zhì)的毒性。
每種微生物都有其適pH值和一定的pH范圍。在適范圍內(nèi)酶活性*高,如果其他條件適合,微生物的生長(zhǎng)速率也*高。大多數(shù)細(xì)菌、藻類和原生動(dòng)物的適pH為6.5-7.5,在pH 4-10之間也可以生長(zhǎng);放線菌一般在微堿性即pH7.5-8*適合;酵母菌、霉菌則適合于pH5-6的酸性環(huán)境,但生存范圍在pH1.5-10之間。有些細(xì)菌甚至可在強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性環(huán)境中生活。
微生物在基質(zhì)中生長(zhǎng),代謝作用改變了基質(zhì)中氫離子濃度。隨著環(huán)境pH值的不斷變化,微生物生長(zhǎng)受阻,當(dāng)超過(guò)低或*高pH值時(shí),將引起微生物的死亡。為了維持微生物生長(zhǎng)過(guò)程中pH值的穩(wěn)定,配制培養(yǎng)基時(shí)要注意調(diào)節(jié)pH值,而且往往還要加入緩沖物以保證pH在微生物生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中的相對(duì)穩(wěn)定。
強(qiáng)酸和強(qiáng)堿具有殺菌力。無(wú)機(jī)酸殺菌力雖強(qiáng),但腐蝕性大。某些有機(jī)酸如苯甲酸可用做防腐劑。強(qiáng)堿可用作殺菌劑,但由于它們的毒性大,其用途局限于對(duì)排泄物及倉(cāng)庫(kù)、棚舍等環(huán)境的消毒。強(qiáng)堿對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌與病毒比對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌作用強(qiáng)。
3.氧化還原電位:
氧化還原電位(Φ)對(duì)微生物生長(zhǎng)有明顯影響。環(huán)境中Φ值與氧分壓有關(guān),也受pH的影響。pH值低時(shí),氧化還原電位高;pH值高時(shí),氧化還原電位低。
各種微生物生長(zhǎng)所要求的Φ值不一樣。一般好氧性微生物在Φ值+0.1伏以上均可生長(zhǎng),以Φ值為+0.3伏-+0.4伏時(shí)為適。厭氧性微生物只能在Φ值低于+0.1伏以下生長(zhǎng)。兼性厭氧微生物在+0.1伏以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸,在+0.1伏以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵。
4.輻射:
輻射是指通過(guò)空氣或外層空間以波動(dòng)方式從一個(gè)地方傳播或傳遞到另一個(gè)地方的能源。它們或是離子或是是電磁波。電磁輻射包括可見(jiàn)光、紅外線、紫外線、X射線和Υ射線等。
(1)紫外輻射 紫外線是非電離輻射,以波長(zhǎng)265-266納米的殺菌力*強(qiáng)。紫外輻射對(duì)微生物有明顯的致死作用,是強(qiáng)殺菌劑,紫外殺菌燈管在醫(yī)療衛(wèi)生和無(wú)菌操作中廣泛應(yīng)用。由于紫外線穿透能力差,不易透過(guò)不透明的物質(zhì),故紫外殺菌燈只適用于空氣及物體表面消毒。
(2)電離輻射 X射線與α射線、β射線和Υ射線均為電離輻射。在足夠劑量時(shí),對(duì)各種細(xì)菌均有致死作用。常用于一次性塑料制品的消毒,也用于食品的消毒。
5.干燥:
水分是微生物的正常生命活動(dòng)*的。干燥會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失水而造成代謝停止以至死亡。微生物的種類,環(huán)境條件,干燥的程度等均影響干燥對(duì)微生物的效果。休眠孢子抗干燥能力也很強(qiáng),在干燥條件下可長(zhǎng)期不死,這一特性已用于菌種保藏,如用砂土管來(lái)保藏有孢子的菌種。在日常生活中也常用烘干、曬干和熏干等方法來(lái)保存食物。
6.滲透壓:
水或其他溶劑經(jīng)過(guò)半透性膜而進(jìn)行擴(kuò)散的現(xiàn)象就是滲透。在滲透時(shí)溶劑通過(guò)半透性膜時(shí)的壓力即謂滲透壓。其大小與溶液濃度成正比。
適宜于微生物生長(zhǎng)的滲透壓范圍較廣,而且它們往往對(duì)滲透壓有一定的適應(yīng)能力。突然改變滲透壓會(huì)使微生物失去活性,逐漸改變滲透壓,微生物常能適應(yīng)這種改變。對(duì)一般微生物來(lái)說(shuō),它們的細(xì)胞若置于高滲溶液中,水將通過(guò)細(xì)胞膜從低濃度的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)入細(xì)胞周?chē)娜芤褐校斐杉?xì)胞脫水而引起質(zhì)壁分離,使細(xì)胞不能生長(zhǎng)甚至死亡。相反,若將微生物置于低滲溶液或水中,外環(huán)境中的水將從溶液進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引起細(xì)胞膨脹,甚至使細(xì)胞破裂。
由于一般微生物不能耐受高滲透壓,所以日常生活中常用高濃度的鹽或糖保存食物,如腌漬蔬菜、肉類及蜜餞等。
7.超聲波:
超聲波具有強(qiáng)烈的生物學(xué)作用。超聲波的作用是使細(xì)胞破裂,所以幾乎所有的微生物都能受其破壞,其效果與頻率、處理時(shí)間、微生物種類、細(xì)胞大小、形狀及數(shù)量等均有關(guān)系。
8.重金屬及其化合物:
一些重金屬離子是微生物細(xì)胞的組成成分,當(dāng)培養(yǎng)基中這些重金屬離子濃度低時(shí),對(duì)微生物生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,反之會(huì)產(chǎn)生毒害作用;也有些重金屬離子的存在,不管濃度大小,對(duì)微生物的生長(zhǎng)均會(huì)產(chǎn)生有害或致死作用。因此,大多數(shù)重金屬及其化合物都是有效的殺菌劑或防腐劑。其作用*強(qiáng)的是Hg、Ag和Cu。如:二氯化gong又名升gong,是殺菌力*的消毒劑。0.1-1%濃度的xiao酸銀常用于皮膚的消毒。
9.有機(jī)化合物:
對(duì)微生物具有有害效應(yīng)的有機(jī)化合物種類很多,其中酚、醇、醛等能使蛋白質(zhì)變性,是常用的殺菌劑。
酚:酚又名石炭酸。它們對(duì)細(xì)菌的有害作用可能主要是使蛋白質(zhì)變性,同時(shí)又有表面活性的作用,破壞細(xì)胞膜的透性,使細(xì)胞內(nèi)含物外溢。當(dāng)濃度高時(shí)是致死因子,反之則起抑菌作用。
甲酚是酚的衍生物。殺菌力比酚強(qiáng)幾倍。甲酚在水中的溶解度較低,但在皂液與堿性溶液中易形成乳液。市售的消毒劑煤酚皂液(來(lái)蘇爾)就是甲酚與肥皂的混合液,常用3-5%的溶液來(lái)消毒皮膚、桌面及用具等。
醇:它是脫水劑、蛋白質(zhì)變性劑,也是脂溶劑,可使蛋白質(zhì)脫水、變性,損害細(xì)胞膜而具殺菌能力。乙醇是普遍使用的消毒劑,常用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的玻棒、玻片及其他用具的消毒。50-70%的乙醇便可殺死營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞;70%的乙醇?xì)⒕Ч?好,超過(guò)70%以至*效果較差。
甲醛:甲醛也是一種常用的殺細(xì)菌與殺真菌劑,效果良好。純甲醛為氣體狀,可溶于水,市售的福爾馬林溶液就是37-40%的甲醛水溶液。
10.鹵族元素及其化合物:
dian:是強(qiáng)殺菌劑。3-7%dian溶于70-83%的乙醇中配制成dian酊,是皮膚及小傷口有效的消毒劑。dian一般都作外用藥。
lv氣或氯化物:這是一類*廣泛應(yīng)用的消毒劑。 lv氣一般用于飲水的消毒,次氯酸鹽等常用作食品加工過(guò)程中的消毒。lv氣和氯化物的殺菌機(jī)制,是氯與水結(jié)合產(chǎn)生了次氯酸(HClO),次氯酸易分解產(chǎn)生新生態(tài)氧,這是一種強(qiáng)氧化劑,對(duì)微生物起破壞用。
11.表面活性劑:
具有降低表面張力效應(yīng)的物質(zhì)稱為表面活性劑。這類物質(zhì)加入培養(yǎng)基中,可影響微生物細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂。如肥皂、洗衣粉等。
12.染料:
染料,特別是堿性染料,在低濃度下可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。由于這些染料具有選擇性抑菌的特點(diǎn),故常在培養(yǎng)基中加入低濃度的染料配制成選擇培養(yǎng)基。例如:堿性三苯甲烷染料,包括孔雀綠、亮綠、結(jié)晶紫等,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有很強(qiáng)的抑制作用。
13.化學(xué)療劑:
能直接干擾病原微生物的生長(zhǎng)繁殖并可用于治療感染性疾病的化學(xué)藥物即為化學(xué)療劑。它能選擇性地作用于病原微生物新陳代謝的某個(gè)環(huán)節(jié),使其生長(zhǎng)受到抑制或致死。但對(duì)人體細(xì)胞毒性較小,故常用于口服或注射。化學(xué)療劑種類很多,按其作用與性質(zhì)又分為抗代謝物和抗生素等。